アデノウイルス迅速検査-鼻分泌

使用目的：

SARS-CoV -2核酸検査キットは、鼻咽頭スワブ、中咽頭スワブ、および喀痰中のCOVID-19の核酸の定性的検出に適用されます。 テスト結果は、感染症または疑わしい患者の分子診断の基礎を提供し、臨床診断の唯一の基準として使用されるべきではありません。

材料：

テスト手順：

A.サンプル準備

抽出されたRNAは、SARS-CoV-2核酸検査キットの出発物質です。

重要：各核酸抽出手順は、1つのポジティブコントロール（40μL、滅菌生理食塩水/ PBSで目的の容量に希釈）および1つのネガティブコントロール（40μL、滅菌生理食塩水/ PBSで目的の容量に希釈）と同時に実行する必要があります。

以下の市販の核酸抽出キットを使用することをお勧めします。PureLinkTMウイルスRNA/DNAミニキット（Invitrogen）。 ウイルスRNAミニキット（QIAGEN）; TIANamp Hi-DNA / RNAキット（TIANGEN）;

B.リアクションミックスのセットアップ

1.すべての試薬とサンプルは、使用前に完全に解凍し、完全に混合し、室温（約18〜25度）で短時間遠心分離する必要があります。

2.適切なサイズのポリプロピレン製マイクロ遠心チューブに必要な量のリアクションミックスを準備します。

3. 25 µLのリアクションミックスを適切なオプティカル96-ウェルリアクションプレートまたは適切なオプティカルリアクションチューブの必要な各ウェルにピペットで入れます。

C.テンプレートの追加

1.サンプル/ポジティブコントロール/ネガティブコントロールから抽出したRNA5μLを追加します。 総量は30μLです。

2.ピペッティングを上下/ボルテックスして、サンプルとコントロールをリアクションミックスと完全に混合します。

3.適切な蓋または光学接着フィルムで96-ウェル反応プレートを閉じ、適切な蓋で反応チューブを閉じます。

4.マイクロタイタープレートローターを備えた遠心分離機で96-ウェル反応プレートを約2500rpmで30秒間遠心分離します。

D.リアルタイムPCR装置のプログラミング

さまざまなリアルタイムPCR機器のセットアップとプログラミングに関する基本情報については、それぞれの機器のユーザーマニュアルを参照してください。アッセイはABI7500リアルタイムPCRシステム用に最適化されています。 PCRの実行は、以下の表に記載されているサイクリング条件で実行されます。

蛍光検出器を定義する

*機器の蛍光内部リファレンスを「なし」に設定してください。例：ABIシリーズ機器の場合、「パッシブリファレンス」を「なし」に設定します。

E.データ分析

分析パラメータを設定し、関連機器の取扱説明書に従ってデータを分析してください。

例としてABI7500を取り上げます。

ベースラインは、増幅の初期サイクルで見られるバックグラウンド蛍光を排除するが、増幅シグナルがバックグラウンドを超えて上昇する領域と重ならない範囲に設定する必要があります（開始値：3〜10;終了値：{{2} }）。 サイクルしきい値（Ct）は、指数フェーズのベースにある必要があります。 「分析」をクリックすると、分析結果が自動的に取得され、「レポート」ウィンドウで検出結果が読み取られます。

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